营养期杀虫蛋白(Vip3Aa)是苏云金芽孢杆菌在营养生长阶段产生的一种新型杀虫蛋白,对许多鳞翅目害虫具有较强的杀虫活性。研究人员以鳞翅目害虫草地贪夜蛾为模型,筛选获得了与Vip3Aa抗性相关的基因(Sfmyb基因)。
(1)研究人员首先采用RNA干扰(RNAi)技术使草地贪夜蛾体内部分Sfmyb基因沉默,发现幼虫对Vip3Aa的敏感性显著降低,由此说明Sfmyb基因与Vip3Aa抗性的关系是
_____。
(2)研究人员通过启动子活性实验发现草地贪夜蛾抗性品系中Sfmyb基因启动子的活性低于敏感品系。由此推测,Vip3Aa抗性的产生可能是由于Sfmyb基因启动子活性下调后影响
_____,从而改变了Sfmyb基因的转录水平。进一步研究发现,抗性品系中Sfmyb基因启动子发生了多个位点的突变和缺失。与敏感品系相比,抗性品系中Sfmyb基因控制合成的蛋白质的氨基酸序列
_____(填“发生”或“不发生”)改变,原因是
_____。
(3)进一步研究发现,Sfmyb基因的表达产物转录因子myb(能识别特定DNA序列并与之结合)可调控下游祀标基因的农达水平从而导致抗性性状的出现。研究人员采用反向酵母单杂交技术对某待测基因是否是myb的靶标基因进行鉴定,具体操作步骤为:
①采用PCR技术扩增待测基因,再将待测基因插入下图结构N所示的启动子上游,构建基因表达载体1,将Ⅰ导入营养缺陷型酵母菌中。

②将Sfmyb基因和AD基因(能表达出转录激活蛋白AD)融合后构建基因表达载体Ⅱ.将其转入上述转基因酵母菌中,融合基因表达出的转录因子myb和AD组合成复合蛋白,当myb能识别待测基因并与之结合时,AD便发挥转录激活活性,诱导下游组氨酸合成基因和色氨酸合成基因表达。
③将上述转基因酵母菌接种到特定的固体培养基上培养,观察是否有菌落产生。
步骤①中,PCR扩增待测基因时加入的引物需满足的条件是
_____;为确定结构N中待测基因插入方向正确,采用PCR技术检测时,应选择上图中的引物
_____。步骤③中。特定的固体培养基是指
_____;若观察到培养基中有酵母菌菌落分布,则说明
_____,得出上述结论的依据是
_____。