学进去

获得抗除草剂转基因玉米的技术流程如下图。相关操作叙述正确的是（       ）

A．在培养基中添加T-DNA片段侵染农杆菌

B．用含四环素的培养基筛选转化成功的农杆菌

C．用氯化钙处理愈伤组织使其易于吸收DNA

D．用PCR技术检测除草剂抗性基因是否翻译

CRISPR/dCas9基因抑制系统来源于CRISPR/Cas9，Cas9酶能够切割核酸片段，当其特定的结构区域发生改变后，失去切割功能，称为dCas9，但仍然能由gRNA引导后与DNA结合，如下图所示。对该系统理解错误的是（       ）

A．CRISPR/dCas9是由蛋白质与RNA构成的复合体

B．正常的Cas9酶不能催化磷酸二酯键的断裂

C．gRNA能与DNA上特定的碱基序列互补配对

D．dCas9与靶位点结合可以直接干扰转录的进行

DNA粗提取后，经纯化、扩增，可通过琼脂糖凝胶电泳鉴定分子量大小。相关实验叙述错误的是（       ）

A．DNA不溶于95%的冷酒精，但可溶于2mol/L的NaCl溶液

B．将二苯胺试剂滴加在提取出的丝状物上，若变蓝可鉴定为DNA

C．将扩增得到的DNA与含指示剂的缓冲液注入凝胶加样孔中

D．DNA分子量越小，在凝胶中的迁移速率越快，离加样孔越远

PCR引物的5'端无严格限制，可用于添加限制酶切位点等序列，对该PCR过程理解正确的是（       ）

A．图示环节所需的温度比上一个环节的高

B．设计引物时需已知DNA模板的全部碱基序列

C．Taq DNA聚合酶只能从引物的3'端延伸DNA链

D．延伸出的子链与DNA模板的碱基序列完全相同

十溴联苯醚（C₁₂Br₁₀O）是一种含碳有机物，具有良好的阻燃性和化学稳定性而被广泛应用。但长期接触十溴联苯醚会危害人类健康和全球环境。科研人员拟从活性污泥中筛选出能有效降解十溴联苯醚的好氧细菌。
(1)科研人员配制________的选择培养基，同时添加微生物生长繁殖所需的水、无机盐和________等营养物质。培养基采用________法进行灭菌。
(2)溶解适量活性污泥，3天后，取________（上层/下层）样液加入到含十溴联苯醚的培养液中。每3天重复上述操作，并逐步提高十溴联苯醚的浓度。最后取菌液1mL用________进行梯度稀释，并接种在选择培养基上，观察________，鉴定菌种类别，获得高效降解十溴联苯醚的菌株F。
(3)重金属常伴随十溴联苯醚释放到环境中，为探究不同浓度的Cu²⁺对菌株F降解十溴联苯醚的影响，科研人员测定了相关指标，结果如下图，表明________。

白花前胡是我国一种传统中药材，其内生真菌能产生多种次生代谢物。研究者欲从白花前胡的内生真菌中获得抗菌化合物，展开相关研究。
(1)为分离出内生菌，待植物表面长出菌丝时，挑取尖端菌丝采用_________法接种在培养基上。经多次纯化培养，分离出7株不同内生真菌，编号为b₁～b₇。
(2)培养上述内生真菌，从其发酵液中萃取粗提取物，并用甲醇溶解。为检测内生真菌粗提取物对病原菌是否有抑制作用，设计了以下实验。
①将若干个牛津杯（圆形小管）竖直立在琼脂凝胶平板上，向牛津杯外围的平板上倾倒一定浓度含有病原菌的培养基，凝固形成薄层后，取出牛津杯（如图所示）。再向牛津杯制造的多个小孔中分别加入不同的液体，对照组1加入适量抗生素，对照组2加入________，实验组加入________。

②培养一段时间后，培养基薄层变浑浊，原因是________。同时在某些小孔附近出现抑菌圈，测量抑菌圈的大小，结果如下表，表明________。

	抑菌圈直径/mm
菌株编号	金黄色葡萄球菌	肠炎沙门氏菌.	大肠埃息氏菌	铜绿假单胞菌
bl	17.9	17.5	18.0	22.9
b2	31.3	36.8	36.8	34.3
b3	27.8	39.0	34.0	16.5
b4	17.5	-	-	-
b5	31.8	26.0	30.3	25.3
b6	-	-	-
b7	29.8	30.0	35.5	24.2
对照组1	22.5	30.1 .	32.2	33.5
对照组2	-	-	-	-

注:“-”代表无明显抑菌效果，牛津杯外径为8mm。
(3)进一步从内生真菌粗提取物中分离出有抑菌作用的化合物Q，有人推测化合物Q可能是通过损伤病原菌的细胞膜，引起细胞内K⁺大量外流而发挥抑菌作用。为验证上述推测，请选用以下材料和设备设计实验，写出实验思路。________
主要实验材料和设备：
化合物Q、含金黄色葡萄球菌的培养液、细菌培养箱、离子检测仪

甘蓝型油菜引入我国历史较短，其遗传基础狭隘。菘蓝（别名“板蓝根”）是传统中药材，具有广谱抗病毒特性。研究人员利用甘蓝型油菜（体细胞中染色体数为38）与菘蓝（体细胞中染色体数为14）进行体细胞杂交，培育抗病毒的甘蓝型油菜-菘蓝单体附加系，过程如图1。

(1)甘蓝型油菜与菘蓝的体细胞经________酶处理后获得原生质体，培养原生质体时，需要考虑培养液的________，以维持细胞正常的形态和功能。经________过程形成愈伤组织，发育为完整的再生植株F₁。植物体细胞杂交技术依据的生物学原理有：________。（至少答出两个）
(2)将F₁与甘蓝型油菜回交，获得BC₁，其染色体组成为________（只用字母表示）。用BC₁与甘蓝型油菜再一次回交，得到的BC₂植株群体的染色体数目范围是________。
(3)研究人员从BC₂筛选出7种只含有1条菘蓝染色体的甘蓝型油菜-菘蓝单体附加系（A、B、C、D、E、F、G）。且这条染色体上携带有抗病毒基因。为探究甘蓝型油菜-菘蓝单体附加系在抗新冠病毒（SARS-CoV-2）中的作用，研究人员用其提取物处理动物细胞，24h后感染新冠病毒，一段时间后收集病毒细胞培养液，检测病毒的含量，结果如图2。

①作为标准参考的GADPH蛋白表达量________，可排除无关变量对实验结果的影响。
②结果表明：________。

遗传毒性物质常存在于被化学物质污染的水体，可损伤生物的DNA，严重威胁人类健康。研究人员通过基因工程改造大肠杆菌，筛选对遗传毒性物质反应灵敏的工程菌株，以用于水质检测。
(1)大肠杆菌DNA中存在可被遗传毒性物质激活的毒性响应启动子序列，将毒性响应启动子插入图1所示表达载体的P区，获得基因工程改造的大肠杆菌。当改造后的大肠杆菌遇到遗传毒性物质时，________识别并与启动子结合，驱动噬菌体裂解基因（SRR）________，表达产物可使大肠杆菌裂解。
(2)研究人员选取启动子sul准备与图1表达载体连接。图2显示了启动子sul内部存在的酶切位点，横向箭头表示转录方向。

①据图1、2信息，为确保启动子sul可与已被酶切的表达载体正确连接，克隆启动子sul时，应在其A端和B端分别添加限制性内切核酸酶________的酶切位点。
②将重组表达载体导入大肠杆菌，置于含有________的选择培养基中进行筛选、鉴定及扩大培养，获得工程菌sul。
(3)研究人员陆续克隆了其他4种启动子（rec、imu、qnr、cda），分别连入表达载体，用同样的方法获得导入重组载体的工程菌，以筛选最灵敏的检测菌株。
①将5种工程菌和对照菌在基础培养基中培养一段时间后，检测菌体密度，结果如图3，说明工程菌在自然生长状态下不会产生自裂解现象，理由是________。
②上述菌株在基础培养基中生长 2 h时加入遗传毒性物质，检测结果如图4。据图可知，5种工程菌均启动了对遗传毒性物质的响应，且转入rec启动子的菌株最________。

(4)下列关于该工程菌的叙述，正确的包括________

A．该工程菌可能用于检测土壤、蔬菜中的农药残留量

B．该毒性响应启动子序列广泛存在于自然界所有物种中

C．其表达产物可裂解大肠杆菌，检测后的剩余菌液可直接倒掉

D．低温保存该工程菌，是为了降低细胞呼吸以减少有机物的消耗

学习以下材料，回答（1）～（4）题。
不断发展的单克隆抗体技术
1975年，生物学家创造了以杂交瘤细胞方式制备单克隆抗体的技术。自1986年全球首个鼠源单抗药物上市以来，单抗药物治疗方向不断发展，覆盖肿瘤、心血管疾病、自身免疫病、神经性疾病和抗感染等各个领域。
最早期的单克隆抗体均为鼠源单抗，在理论研究及实践应用中发挥了重要作用。然而，鼠源单抗作为异源蛋白，在人体内活性低，稳定性差；且容易让人产生免疫反应
——人抗鼠抗体反应（HAMA）而被清除。第二代人鼠嵌合单抗，是从杂交瘤细胞分离出鼠源抗体可变区基因，与人源抗体恒定区基因连接，插入适当表达载体，转染宿主细胞表达产生的。如图，人源基因序列占整个抗体的大部分，降低了单抗的HAMA 反应。最新一代单抗是全人源单克隆抗体，氨基酸序列均由人源基因编码，进入人体内后发生超敏或排斥反应的可能性最低。目前制备全人源单克隆抗体的技术包括转基因鼠技术、抗体库技术以及单个B细胞技术等。
转基因鼠技术是将优化的人源抗体合成基因，导入到本身不能合成抗体的免疫缺陷鼠的基因组中，在对转基因鼠进行特定抗原免疫后，后续流程与传统单抗制备方法一致，产生的抗体均由插入的人源抗体基因序列编码，也保证了单抗的抗原特异性和结合亲和力。
噬菌体展示技术是抗体库技术中的一种，将所选抗体库中抗体的可变区基因，与噬菌体壳蛋白基因构成融合基因，随着子代噬菌体重组而显示在噬菌体表面，从而筛选出抗体库中与特定抗原结合亲和力高的抗体基因。
单个B细胞技术可从患者或接种疫苗人群的外周血中，根据抗原和细胞表面标记物筛选出单个B 细胞，再利用逆转录 PCR 等技术直接获得抗体合成基因。单个B细胞技术的优点是只需少量细胞就可以快速高效地筛选出潜在的单克隆抗体，在新发、突发传染病等紧急事件中，可以快速获得针对病原微生物的高亲和力抗体。

(1)上述技术中，除噬菌体展示技术外，大多需要在________箱中进行动物细胞培养。当培养瓶中贴壁生长的细胞出现________现象时，用________酶处理后进行传代培养。
(2)传统方法通过杂交瘤细胞制备单抗时，需向小鼠注射________，再从小鼠脾脏中取已免疫的B细胞，与骨髓瘤细胞混合后，加入化学试剂________诱导细胞融合。对经选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和________，多次筛选后才能获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。
(3)文中提到的新技术中，不需要利用动物细胞融合技术的有________；需要使用基因工程技术的有________。
A. 人鼠嵌合单抗技术                         
B. 转基因鼠技术     
C. 噬菌体展示技术                            
D. 单个B细胞技术
(4)下面是利用单个B细胞技术，针对某新型病原体表面的抗原X，制备单克隆抗体的技术路径，请结合材料补充“________”上的内容。
采集康复者外周血→筛选能够结合X的B细胞→提取________→________→根据抗体基因通用序列设计引物进行PCR→获得________基因→________→导入受体细胞→获得抗X的单克隆抗体。

杜氏肌营养不良症是一种由于D基因发生突变导致的肌肉萎缩疾病，患者最终因心肌功能障碍死亡。研究者通过构建模型小鼠，进行该病的基因治疗研究。

(1)将干扰序列通过________法，导入小鼠受精卵以敲除D基因，体外培养一段时间后，通过________技术，由代孕母鼠生出小鼠。进行________水平的检测与鉴定后，确认模型小鼠构建成功。
(2)AAV病毒能够感染多种宿主细胞，包括肌细胞，广泛用于基因治疗。为获得重组AAV病毒，利用__________酶将肌细胞中特异表达的基因的________和D基因等元件构建为表达载体，将AAV病毒复制和包装所必需的基因构建为包装载体，两种载体共同转染包装细胞（肾上皮细胞），如图。裂解包装细胞后，通过_________法收集重组AAV病毒。
(3)为验证重组AAV病毒的治疗效果，可采用腹腔注射的方法进行治疗，有人设计了如下实验方案：将含有重组AAV病毒的缓冲液，分别注射于模型小鼠与健康小鼠的腹腔中，检测两组小鼠D蛋白的表达量。请对该实验方案作出评价并加以完善。________