环介导恒温扩增技术(LAMP),因操作简便,能快速、精确地进行基因扩增而得到广泛的应用。LAMP使用的酶是有链置换效应的Bst DNA聚合酶,其原理如下图1所示,请回答下列问题:


(1)LAMP技术温度控制在63℃左右,与常规PCR相比,其简化之处是不需要
_______;另一个简化之处是通过肉眼观察有无白色沉淀焦磷酸镁即可判断靶基因是否复制,推测其中的焦磷酸来自
_______水解。
(2)如上图1,针对靶基因上的6个区域设计了4条引物,其中决定主要产物长度的是
___,由引物F3延伸出子链的作用是
_______。部分单链DNA两端成环状,环状结构中局部双链的形成依赖
_______原则。
(3)将LAMP技术用于猕猴桃褪绿环斑相关病毒(AcCRaV)的核酸检测,为找到最适宜的靶序列扩增温度,研究者设定56-63℃温度梯度,并进行染色、电泳等操作后,得到下图2实验结果。据图可知,此靶序列最佳扩增的温度为
_______℃,电泳后出现梯形条带,该结果说明
_______。
(4)将LAMP技术用于新冠病毒(SARS-CoV-2)的核酸检测,先要进行如下操作:
实验步骤 | 简要操作过程 |
_______ | 用医用棉签从上呼吸道采集咽拭子或鼻拭子,然后低温封存并送检测机构进行检测 |
_______ | 向样本中加入Trizol裂解蛋白质成分,再加入氯仿并离心,吸取上层水相置于新的EP离心管中,加入等体积的异丙醇,离心弃上清液,加入乙醇洗涤,离心弃上清液,晾干后加入DEPC水解液破坏RNA水解酶。 |
合成cDNA | 向样本中加入缓冲液、______和dNTP,在PCR仪中获得cDNA产物。 |