学进去

城市绿化土壤中氮素缺少或过量均会严重影响绿化树种的生长发育。研究者将小肽转运蛋白OsPTR9基因（记为A基因）通过转基因技术导入某种二倍体杨树细胞中，筛选得到4株对低氮胁迫具有耐受性的转基因幼苗，并对这4株转基因幼苗的基因进行PCR，确定其耐受低氮胁迫与A基因有关。请回答下列问题：

(1)采用农杆菌转化法将小肽转运蛋白A基因整合到杨树细胞的染色体上，该过程需使用DNA连接酶，图中含有磷酸基团的部位是________（填字母）。若转基因幼苗表型由A基因决定，则野生型植株特有的表型是________。
(2)用PCR技术扩增转基因幼苗叶片中的DNA需要设计两种引物分别与A基因两端的序列相结合，遵循________原则；为保证扩增出来的A基因能与农杆菌Ti质粒上的________片段正向连接，还需要考虑在两个引物的________（填“3′”或“5′”）端分别插入不同种限制酶的识别序列。
(3)研究者发现上述转基因杨树存在一种2号染色体三体植株。该植株的原始生殖细胞在减数分裂过程中，三条2号染色体能够正常联会和分离（一极2条，一极1条）而产生配子。若已知A基因导入到了2号染色体，且一个A基因只导入到一条染色体上，A基因数量不影响耐低氮程度。利用该杨树与野生型正常杨树进行杂交后分区种植，结果发现其子代植株表现为耐低氮：不耐低氮=5：1，那么亲本转基因三体杨树导入的A基因数量是________个，且子代耐低氮三体植株的基因型是________（不含A基因的染色体用O表示）。