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氨基酸定点突变分析是研究蛋白质的结构和功能、酶催化机理以及对基因表达产物进行定向改造的重要技术。在基因内部引入点突变，是获得氨基酸定点突变的主要方式。下图是利用PCR介导的定点突变技术的原理图，其中三个引物分别为F1（5'—GGAATTCCATATGAGGATCCTCTTTC—3'）（GAATTC为EcoRI识别位点，并切割G和A之间的磷酸二酯键，CATATG为NdeI的识别序列，并切割C和A之间的磷酸二酯键）、F2（5'—TGGGACGACTTCGCCTCGACCATGC—3'）（黑体GA为突变碱基）和R2（5'-CCCCCCGGGGGCGGCCAGCCGCTC—3'）（CCCGGG为SmaI的识别序列，并切割C和G之间的磷酸二酯键），野生型基因已连接在质粒PIK340上，且序列已知。
   
(1)第2轮PCR是在第1轮PCR的反应体系中进行的，虽然只加入了F1引物，但仍能得到突变基因的原因是_____________，得到的突变基因与pT7Blue质粒连接时需用的酶是______________。（填“E．coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）
(2)在IPTG和X-gal存在的条件下，Laz基因表达后，产生蓝色物质，否则为白色。据图分析，在固体培养基上添加IPTG和X-gal后，形成的白色菌落不一定是成功导入克隆载体的大肠杆菌，理由是______________。若要选出成功导入克隆载体的大肠杆菌，还应在培养基中加入______________。
(3)为验证白色菌落中是否成功导入克隆载体，用EcoRI和SmaI双酶切提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳，结果如下图
   
①据图分析，该突变基因的长度大约为_______________。
②为验证2～8号样品中是否发生了预期突变，随机抽取四组进行测序，并与野生型基因进行对比，结果如图
   
该结果说明______________。
(4)若该突变基因成功表达，则可获得氨基酸定点突变的蛋白质，该工程与基因工程的区别是_____________。