学进去

四环素被广泛应用于治疗人及动物的细菌感染，但残留在动物组织、奶制品中的四环素通过食物链进入人体，会对人类健康造成威胁。为保障食品安全和人类健康，科研人员向大肠杆菌体内导入了一些特殊的DNA序列作为生物传感器，从而建立一种简易、灵敏以及准确的四环素检测方法。

   

(1)研究者利用图1所示的原理设计四环素检测传感器（图中GFP为绿色荧光蛋白基因）。当环境中有四环素时，菌体_________________（能/不能）发出绿色荧光，原因为_____________。因此可以通过检测荧光强弱来判定环境中的四环素浓度。
(2)研究者利用基因工程技术构建含四环素检测传感器的大肠杆菌工程菌。
①利用图2所示的质粒1和质粒2，构建同时含片段1和片段2的表达载体，可分别用限制酶__________和__________处理质粒1和质粒2，再用DNA连接酶连接。（四种限制酶的识别序列及切割位点如表所示）

限制酶	E	X
识别序列及切割位点	5′…G↓AATTC…3′ 3′…CTTAA↑G…5′	5′…T↓CTAGA…3′ 3′…AGATC↑T…5′
限制酶	S	P
识别序列及切割位点	5′…A↓CTAGT…3′ 3′…TGATC↑A…5′	5′…CTGCA↓G…3′ 3′…G↑ACGTC…5′

②研究者通过上述方法将所有的启动子和相应基因的DNA片段与载体连接，构建表达载体，导入用___________处理的大肠杆菌细胞内，经过筛选，获得工程菌。
(3)研究者发现在四环素浓度较低时，随四环素浓度增加，工程菌的荧光强度变化不明显。欲获得检测灵敏度更高的传感器（如下图），从以下选项中选择启动子所对应的基因（填选项字母），构建表达载体。

   

启动子：①启动子A——__________②启动子B——__________
③经T7RNA聚合酶特异性诱导开启的启动子——__________
基因：A：R基因
B：GFP基因
C：sfGFP基因（表达荧光强度和稳定性都高于GFP的绿色荧光蛋白）
D：T7基因（表达T7RNA聚合酶，其活性比大肠杆菌RNA聚合酶更高）