学进去

为生产具有特定性能的α-淀粉酶，研究人员从某种海洋细菌中克隆了α-淀粉酶基因（1656个碱基对），利用基因工程大量制备琢α-淀粉酶，实验流程见下图。请回答下列问题：

（1）利用PCR技术扩增α-淀粉酶基因前，需先获得细菌的_________。
（2）为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接，需在引物的____端加上限制性酶切位点，且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点，主要目的是________________。
（3）进行扩增时，反应的温度和时间需根据具体情况进行设定，下列选项中_______的设定与引物有关，________的设定与扩增片段的长度有关。（填序号）
①变性温度②退火温度③延伸温度④变性时间⑤退火时间⑥延伸时间
（4）下图表示筛选获得的工程菌中编码α-淀粉酶的mRNA的部分碱基序列：

图中虚线框内mRNA片段包含___个密码子，如虚线框后的序列未知，预测虚线框后的第一个密码子最多有__种。
（5）获得工程菌表达的α-淀粉酶后，为探究影响酶活性的因素，以浓度为1%的可溶性淀粉为底物测定酶活性，结果如下：

缓冲液

50mmol/LNa2HPO4-KH2PO4

50mmol/LTris-HCl

50mmol/LGly-NaOH

pH

6．0

6．5

7．0

7．5

7．5

8．0

8．5

9．0

9．0

9．5

10．0

10．5

酶相对活性%

25．4

40．2

49．8

63．2

70．1

95．5

99．5

85．3

68．1

63．7

41．5

20．8

根据上述实验结果，初步判断该α-淀粉酶活性最高的条件为______。